Күпчелек вирусларның геном эзлеклелеге билгеле.Нуклеин кислотасы зоналары, алар тулы вируслы ДНК яки РНК сегментлары белән гибридлаштыру өчен эшләнгән ДНКның кыска сегментлары.Полимераз чылбыр реакциясе (PCR) - вирусны ачыклау өчен эффектив техника.Күптән түгел югары үткәрү диагностикалау ысуллары эшләнде.
A. Нуклеин кислотасы гибридизация техникасы
Нуклеин кислотасы гибридизациясе, нигездә Көньяк блотлау (Көньяк) һәм Төньяк блотлау (Төньяк), вирус диагностика өлкәсендә тиз үсә торган яңа техника.Гибридизация анализының нигезе - вируслы ДНК яки РНК сегментлары белән гибридлаштыру өчен эшләнгән ДНКның кыска сегментларын куллану.Heatingылыту яки эшкәртү белән эшкәртү белән, ике катлы максатлы ДНК яки РНК бер полосага бүленәләр, аннары нык таянычта мобилизацияләнәләр.Аннан соң, зонд ДНК яки РНК белән кушыла һәм гибридлаштырыла.Зонд изотоп яки радиоактив булмаган нуклид белән язылганлыктан, максатлы ДНК яки РНК авторадиография яки биотин-авидин системасы аша ачыкланырга мөмкин.Вируслы геномнарның күбесе клонланган һәм эзлекле булганлыктан, аларны вирус - махсус эзлеклелектә үрнәктә тикшерү рәвешендә табып була.Хәзерге вакытта гибризлаштыру ысуллары үз эченә ала: нокталар, күзәнәкләрдәге ситу гибридизациясендә, ДНК блотировкасы (ДНК) (Көньяк блок) һәм РНК блотировкасы (РНК) (Төньяк блок).
B.PCR технологиясе
Соңгы елларда витро нуклеин кислотасын көчәйтү техникасы PCR нигезендә, сизгер яки культурасыз вирусларны сынау өчен эшләнде.PCR - витро полимераз реакциясе белән махсус ДНК эзлеклелеген синтезлый торган ысул.PCR процессы өч этаптагы җылылык циклын үз эченә ала: денатурация, аннальинг һәм киңәйтү temperatureгары температурада (93 ℃ ~ 95 ℃), ике катлы ДНК ике бер ДНК полосасына бүленә;аннары түбән температурада (37 ℃ ~ 60 ℃), ике синтезланган нуклеотид праймеры тулы ДНК сегментларына анналь;ә Так ферменты өчен тиешле температурада (72 ℃), яңа ДНК чылбырларын синтезлау 3'н праймердан тулы ДНКны шаблон һәм бер нуклеотид материал буларак куллана.Шулай итеп, һәр циклдан соң бер ДНК чылбырын ике чылбыр көчәйтергә мөмкин.Бу процессны кабатлап, бер циклда синтезланган һәр ДНК чылбыры киләсе циклда шаблон буларак кулланылырга мөмкин, һәм һәр циклда ДНК чылбырлары саны икеләтә арта, димәк PCR җитештерү 2н бүрәнә тизлегендә көчәйтелә.25-30 циклдан соң, PCR җитештерү электрофорез аша билгеләнә, һәм махсус ДНК продуктларын UV нуры астында күзәтергә мөмкин (254нм).Specзенчәлек, сизгерлек, уңайлык өстенлеге өчен PCR HCV, HIV, CMV, HPV кебек күп вируслы инфекцияләргә клиник диагностикада кабул ителде.PCR бик сизгер булганга, ул вирус ДНКсын fg дәрәҗәсендә ачыклый ала, ялган позитив булмасын өчен, операция бик сак булырга тиеш.Моннан тыш, нуклеин кислотасы сынавында уңай нәтиҗә үрнәктә тере йогышлы вирус барлыгын аңлатмый.
PCR техникасын киң куллану белән, төрле сынау максатларында PCR техникасы нигезендә яңа техника һәм ысуллар эшләнә.Мәсәлән, реаль вакыт санлы PCR вирус йөген ачыклый ала;PCR ситуасында тукымаларда яки күзәнәкләрдә вирус инфекциясен ачыклау өчен кулланыла;Ояланган PCR PCR үзенчәлеген арттырырга мөмкин.Алар арасында реаль вакыт санлы PCR тизрәк эшләнде.TaqMan гидролизы, гибридизация зонасы һәм молекуляр маяк зонасы кебек күп яңа техника реаль вакытта санлы PCR техникасына кушылды, бу клиник тикшеренүләрдә киң кулланыла.Пациентларның тәнендәге сыеклыктагы вируслы йөкне ачыклаудан тыш, бу ысул наркоманиягә чыдам мутантны ачыклау өчен дә кулланылырга мөмкин.Шуңа күрә, реаль вакыт санлы PCR, нигездә, дәвалау эффектын бәяләүдә һәм наркотикларга толерантлык күзәтүендә кулланыла.
C. Вируслы нуклеин кислоталарын югары үткәрү
Яңа барлыкка килгән йогышлы авыруларны тиз диагностикалау ихтыяҗларын канәгатьләндерү өчен, ДНК чиплары (ДНК) кебек югары үткәрүчәнлекне ачыклау ысуллары булдырылды.ДНК чиплары өчен махсус зоналар синтезланалар һәм бик югары тыгызлыктагы кечкенә кремний чипларына бәйләнәләр, үрнәк белән гибридлаштырыла торган ДНК зонасы микроаррей (ДНК) формалаштыру өчен.Гибридизация сигналын конокаль микроскоп яки лазер сканеры белән күз алдына китерергә һәм компьютер белән эшкәртергә һәм төрле геннар турында зур мәгълүматлар тупларга мөмкин.Ике төрле ДНК чипы бар."Синтез чип" түбәндәгечә: махсус олигонуклеотидлар чипларда синтезланган.Икенчесе - ДНК бассейны.Слайдта клонланган геннар яки PCR продуктлары тәртиптә бастырыла.ДНК чип технологиясенең өстенлеге - бер үк вакытта бик күп ДНК эзлеклелеген ачыклау.Патоген ачыклау чипының соңгы версиясе берьюлы 1700 дән артык кеше вирусын ачыклый ала.ДНК чип технологиясе традицион нуклеин кислотасы гибридизация ысуллары проблемаларын чиште һәм вируслы диагностика һәм эпидемиологик тикшеренүләрдә бик киң кулланмаларга ия.
Пост вакыты: 23-2020 декабрь